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，并将酸碱度调到pH值5。7～5。8。根据需要做成固体培养基或液体培养基（不加琼脂），装在试管中或三角瓶、罐头瓶中，高压灭菌后放在无菌室内备用。
第四步，进行茎尖组织剥离和接种。在经过高温处理和催芽的块茎上取3～4厘米长的幼芽若干个，经多次自来水冲洗和多道消毒后，在无菌室内的超净工作台上的40倍的解剖镜下进行茎尖剥离，用解剖针剥去茎尖上边包着的幼叶，露出茎尖组织，切取带1～2个叶原基的茎尖组织，大小在0。1～0。3毫米之间。随之把茎尖组织接种到事先准备好的装有培养基的试管中，每一个试管一个茎尖。还有一种方法是把经过消毒的薯芽，直接插入培养基中，生根长成苗后，再做剥离，成活率高，效果好。
第五步，组织培养。把带有茎尖组织的试管，放在温度保持在20℃～25℃的培养室的培养架上，光照要达到2000～3000勒，每天照16小时以上。经30～40天，成活的茎尖，颜色发绿，茎明显的伸长，叶原基长成小叶。之后，再将其转接到生根培养基中培养，再经3～4个月长成有根系的3～4个叶片的小单株，叫“茎尖苗”。然后按节切成段，进行扩繁，分植于3～4个三角瓶中（编号，如1…1、1…2、1…3等）培养1个月，又长成新的“茎尖苗”，待下一步进行病毒检测。
第六步，进行病毒检测，做出鉴定。检测方法多采用酶联免疫吸附法（ELISA），检测花叶病毒、重花叶病毒和卷叶病毒。用反复聚丙烯酰胺凝胶电泳方法来检测类病毒。检测时同一编号取1瓶检测，根据检测结果，如果各种病毒都为0的，就是脱毒成功的，相同编号的苗子留下继续剪段扩繁，此苗正式称为“脱毒苗”。而仍带有病毒的苗则为失败者，要把相同编号的苗子全部淘汰掉。
第七步，进行脱毒苗快繁。经检测鉴定的的脱毒苗，切段繁成健壮的基础苗，当长到6～8片叶时，再切成4～5段，扦插在MS固体培养基或液体培养基中。在夜间15℃、白天25℃、光照强度3000勒、照射16小时、夜间不见光8小时的条件下，培养20～25天，苗子长大，再进行第二次剪段扩繁，这样每20～25天扩大4～5倍。扩繁过程中还要检测，汰除带毒株系的苗子。按生产计划，扩繁达到一定数量，为下一步生产原原种和微型种薯做好准备。
基础苗除扩繁外，还要保留部分基础苗，为下茬生产扩繁使用。基础苗使用2年左右应重新进行剥离，进行更新，以保持质量。
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（二）微型脱毒种薯和常规脱毒原原种的生产（）
1。微型脱毒种薯生产
在温室或防虫网棚中，采用无土栽培技术，把培养的脱毒苗，扦插在用蛭石或细沙珍珠岩等做基质的苗床或育苗盘上，苗期和结薯期分别喷撒促进长苗、扎根和促进结薯的营养液，也根据需要喷些清水，人工控制光、温、水、肥、气等生长条件。扦插密度一般为3厘米×3厘米，或3厘米×4厘米，每平方米插脱毒苗830～1100株。脱毒苗在基质里生长60天左右即可收获一茬，每平方米可收1000～1500粒重量在1～10克的微型脱毒种薯。由于在防护的条件下，加上不断喷洒防虫药剂，杜绝了传毒媒介传毒，加之基质的更换，所以微型脱毒种薯质量最好，既无病毒，又没有真菌和细菌病害，属顶级脱毒原原种。微型脱毒种薯由于体积小，重量轻，贮存和运输都极为方便。微型种薯虽然个小，但它的生物学特征完全与同品种的大个种薯相同，而且生产能力很强。只要打破休眠期，在适宜条件下，发芽率在95％以上。
脱毒微型种薯生产，由于采取了快繁技术，便于实行规范化、工厂化生产，可生产出大量原原种，比常规原原种生产繁殖系数大大提高，可以加快脱毒种薯推广速度，并提高脱毒种薯的质量水平，所以在国内发展很迅速。目前，还有许多地方试用水培、雾培等方法，进行脱毒微型种薯生产，有的已建成生产线正式生产。
2。常规脱毒原原种生产
在气温相对较低的地方，建造防虫网室，网室内的土地要进行精细整理。把经过室外温度锻炼的脱毒苗移栽到土壤中，每667米2
植苗6000株左右，缓苗后按正常肥、水管理，每隔7天打杀虫剂一次。在薯苗生长过程中，分别在苗期、花期、成熟期进行田间去杂、去劣、去病株，这样生产出的脱毒种薯（相对微型脱毒种薯个头大，在50克以上）称为常规原原种，按代数算为0代（或称当代）。可作为下一代脱毒种薯繁殖材料，或直接作生产田种薯（图15）。
图15 马铃薯茎尖脱毒苗、微型薯、原原种生产程序示意图
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（三）其他各级脱毒种薯的生产（）
经过无菌室、培养室、温室、网棚等保护设施及生物技术，无土栽培或有土栽培等技术措施，得到的脱毒原原种（包括脱毒微型种薯），已是主要病毒和真菌、细菌病毒都为0的健康基础种薯。下一步需要扩大数量，在开放的农田中进行继代扩繁。在扩繁过程中，还应采取有效措施，防止病毒的再侵染，不然就保证不了所繁脱毒种薯的级别质量。
主要措施是繁种田必须与毒源作物有一定的隔离条件，尽量不让传毒媒介飞入繁种田。这就需要认真选择繁种地块，首先是选高海拔、高纬度、低温度、风速大、蚜虫叶蝉等刺吸式口器害虫少的地方，最好有自然隔离条件的草原、林地之间、环山地段等不重茬的地块。在马铃薯集中种植区也要与未脱毒的马铃薯及茄科、十字花科作物、烟草等有500米的距离。如果距离低于500米，应在隔离带中种50米以上的麦类等作物，使蚜虫等飞来时不直接进入繁种田。再就是出苗后，用黄板测蚜虫，即用30厘米×20厘米的纸板，一面涂满黄色广告色，上面再涂一层黄油，钉在1米高的棍子上，插在地边若干个，利用蚜虫趋黄性吸引蚜虫，每天检查，如发现黄板上出现蚜虫，说明已有蚜虫迁飞到繁种田，这时就开始在田间喷洒杀虫药剂，每隔7天喷一次，直到杀秧之前停止。同时要喷洒杀灭真菌、细菌等病害的农药8～10次。收获前10天要用药剂或机械杀秧，以减少病毒进入薯块。
1。脱毒原种生产
按上述条件选地，用脱毒微型种薯或常规脱毒原原种作繁种材料，生长季节认真施药灭虫杀菌，并严格去杂去劣去病株，生产出来的块茎，叫做脱毒原种，按代数算为一代（G1
）。脱毒原种可以作为下一级繁种材料或直接用在生产田种植。
2。脱毒一级种薯生产
按既定条件安排繁种地，生长季节认真落实施药计划，严格去杂去劣去病株，用原种作繁种材料，生产出来的块茎，叫做脱毒一级种薯，按代数算为二代（G2
）。脱毒一级种薯可以作为繁种材料繁下一级种薯，也可作为生产田用种。
3。脱毒二种薯生产
仍应照上述选地条件和技术措施，用脱毒一级种薯作繁种材料进行种薯生产，生产出来的块茎，叫做脱毒二级种薯，按代数算为三代（G3
），脱毒二级种直接用于大田进行商品薯生产。脱毒二级种生产出的块茎，只能用作商品薯，已出了脱毒薯的范围，不再称为脱毒薯，不能再作种薯使用。
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（四）脱毒种薯繁育体系新概念（）
我国著名马铃薯专家屈冬玉、谢开云博士等在2007年发表的《大力推进三代种薯繁育体系建设，提高中国马铃薯种薯质量和生产水平》的论文中，提出了实行“三代种薯繁育体系概念”，主要针对全世界及全中国，种薯分级都处于混乱状态，且种薯质量高低不一的情况，建议全面采用三代种薯体系（G1
—G2
—G3
），即从微型薯生产（G1
种薯）开始，将微型薯生产得到的G2
代种薯再种一年，得到G3
代种薯，将G3
代种薯用于大田商品马铃薯生产。
1。一代种薯（G
1
）
是指在人工隔离条件下（温室、网室或实验室）用脱毒苗生产出的微型种薯（重量在1克以上，20克以下），再次种植时不需要进行切块。可以是利用组培苗（试管苗）在无病害基质（蛭石、草炭、珍珠岩、细沙等）中得到的微型种薯，也可以是利用组培苗（试管苗）在无基质条件（水培或雾培）下得到的微型种薯，还可以是组培苗直接移栽到人工